详细信息SOP--标准操作流程
1、石蜡切片置于65℃烘箱中烘片1h,脱蜡至水,用PBS冲洗三次,每次5 min。 2、切片置于柠檬酸盐缓冲液中待水浴锅沸腾后,计时30min。 3、自然冷却后PBS洗3次,每次5 min。 4、切片放入3%过氧化氢溶液,室温下孵育10 min,以阻断内源性过氧化物酶。 5、PBS洗3次,每次5 min,甩干后5% BSA封闭20 min(封闭电荷)。 6、去除BSA液,每张切片加入50μl稀释的一抗覆盖组织,4℃过夜。 7、PBS洗3次,每次5 min。 8、去除PBS液,每张切片加50μl-100μl相应种属的二抗,4℃孵育50min。 9、PBS洗3次,每次5min。 10、去除PBS液,每张切片加50-100μl新鲜配制DAB溶液,显微镜控制显色。 11、显色完全后,蒸馏水或自来水冲洗,苏木素复染,1%盐酸酒精分化(1s),自来水冲洗,氨水返蓝,流水冲洗。 12、切片经过梯度酒精(70-100%)10min一个梯度,脱水干燥,二甲苯透明,中性树胶封固。 ![]() |
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