Tunel法HRP—Roche公司产品
§ 原理：Tunel即末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TdT-mediatedX-dUTP nick end labeling)法，细胞凋亡时双链DNA会出现许多不对称的断裂点，暴露出3’-OH,末端转移酶（TDT）可催化地G(高)辛、生物素或荧光素等标记的脱氧核苷酸加到3’-OH末端，再通过免疫组化方法进行检测，可以观察凋亡细胞的形态，染色定位及组织中的分布。Tunel法可用于细胞悬液，石蜡/冰冻切片和细胞涂片等多种样本的检测
 
二、试剂组成：In Situ Cell Death Detection Kit(FITC标记--HRP),Cat#:11684817910。1、酶溶液—TDT酶(末端转移酶)5×50ul;2、标记溶液[FITC-11-dUTP 10×反应混合液（内含：1mM dATP, 1mM dCTP, 1mM dGTP,0.65mMdTTP, 0.35mM b-Dutp pH6.5）] 5×550ul；3、检测试剂(抗FITC-HRP既用型 3.5ml)
三、操作流程
大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞 即PC-12    细胞爬片检Tunel 
1、细胞片
   ⑴培养细胞贴壁培养，4%多聚甲醛固定10-20min,蒸馏水洗，0.01mol/L pH7.3 PBS 洗3×3min；
   ⑵ 穿孔：0.1%Triton X-100/PBS 洗5-10min，20ug/L proteinase K 消化 5min ,室温，蒸馏水洗5minX2, PBS 洗3×3min；
   ⑶Tunel混合液的准备  50ul TDT +450ul标记缓冲液
 ⑷滴加50ul/片Tunel混合液  湿盒中  37℃ 1h ；(此步需避光)
 ⑸0.01mol/L pH7.3 PBS 洗3×3min；
 ⑹滴加50ul/片抗FITC-HRP 二抗 湿盒中  37℃  30min； 
 ⑺0.01mol/L pH7.3 PBS 洗3×3min；
⑻.0.04% DAB+0.03%H2O2显色10min，水洗
⑼苏木素衬染1min，    水洗蓝化   系列乙醇脱水
⑽吹干后常规树胶封片。
2、石蜡切片
     ⑴ 4 μm石蜡切片常规脱蜡至水，
     ⑵ PBS洗                      3×3min
     ⑶ 3%H2O2处理，     20min，     室温
     ⑷蛋白酶K 20μg/ml    10-20min        37℃
     ⑸0.1%Triton X-100/PBS 洗5-10min
     ⑹ PBS洗                       3×3min
     ⑺Tunel混合液的准备  50ul TDT +450ul标记缓冲液
     ⑻30μl/每片  湿盒中  37℃ 1h ；(此步需避光)
⑼PBS洗                           3×3min
⑽滴加50ul/片抗FITC-HRP 二抗 湿盒中  37℃  30min； 
   ⑾0.01mol/L pH7.3 PBS 洗3×3min；
⑿ 0.04% DAB+0.03%H2O2显色10min，水洗
⒀苏木素衬染1min，    水洗蓝化   系列乙醇脱水
⒁吹干后常规树胶封片。
四、观察：凋亡指数（apoptosis index，AI）在普通光镜下连续观察10个高倍视野计数阳性细胞数，换祘为平均每平方毫米的凋亡细胞数，即为AI。